Evaluación de las interacciones entre factores proteicos que participan en los procesos de coagulación sanguínea me

EVALUACIÓN DE LAS INTERACCIONES ENTRE FACTORES PROTEICOS QUE PARTICIPAN EN LOS PROCESOS DE COAGULACIÓN SANGUÍNEA MEDIANTE LA IMPLEMENTACIÓN DE ENSAYOS DE RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR (RMN) DE PROTEÍNAS EN SOLUCIÓN.

Las enfermedades cardiovasculares, entre las que se encuentran los infartos cardíacos y los accidentes cerebrovasculares, continúan siendo la principal causa de morbilidad y mortalidad en países desarrollados y en vías de desarrollo (Nichols, 2012).

Lo anterior se debe, en parte, a que las bases estructurales y funcionales de los procesos de formación de los coágulos sanguíneos o trombos se conocen sólo de forma incompleta y fragmentada. La trombina juega un papel esencial en estos procesos, y los fundamentos atómico-moleculares de su interacción con otros factores que participan en el proceso de coagulación son poco conocidos, en particular en el reconocimiento de importantes sustratos como el factor VIII y el receptor de plaquetas, PAR1. Dada la importancia de estos factores de coagulación, y siguiendo con la línea de investigación que se desarrolla actualmente en el proyecto 5401-1510-9201: “Expresión heteróloga, purificación, caracterización y cristalización de factores proteicos que participan en los procesos de coagulación sanguínea”; y en estrecha colaboración con grupos de investigación externos, se pretende caracterizar las interacciones del factor VIII con la trombina mediante RMN en estado líquido. Para ello, se implementará -por primera vez en Costa Rica- la poderosa técnica biofísica de RMN de proteínas para evaluar las interacciones entre estas dos importantes proteínas, el factor VIII y la trombina. Para cumplir esta meta, (1) se expresará de forma heteróloga los fragmentos conectores de los dominios del factor VIII (FVIIIa2 y FVIIIa3) en medio mínimo enriquecido con isótopos de carbono-13 y nitrógeno-15, (2) se purificarán y caracterizarán estos fragmentos recombinantes, y (3) se implementarán progresivamente los diferentes tipos de ensayos mono-, di- y tri-dimensionales de RMN para el análisis y evaluación de las interacciones de las proteínas de interés. Los avances obtenidos en estos estudios de RMN en estado líquido, complementarán los resultados que se están generando en el proyecto 5401-1510-9201 antes mencionado, los cuales en conjunto permitirán avanzar hacia una mejor comprensión de los procesos de interacción entre la trombina y estos factores; -y por lo tanto- de los mecanismos de formación de trombos.

Palabras claves: Enfermedad cardiovascular, RMN de proteínas, trombina, FVIII

• Subárea: Biotecnología de la Salud