Inducción de callogénesis y establecimiento de suspensiones celulares de mora con miras al escalamiento en biorreactor.
Resumen
El cultivo de células vegetales en suspensión es una de las tecnologías más eficientes para la obtención de metabolitos y compuestos de interés comercial, tales como los antioxidantes. Varios estudios científicos han demostrado que una variedad costarricense de mora (Rubus adenotrichus var. “Vino”) posee altos contenidos de compuestos antioxidantes, incluso más que otros frutos reconocidos por esta característica. El Centro de Investigación en Biotecnología, por más de 12 años, ha participado en diferentes proyectos de investigación con este cultivo, incluyendo la variedad “Vino”, y actualmente posee material in vitro establecido en sus colecciones de germoplasma. El proyecto propuesto tiene como objetivo la inducción de callogénesis y el establecimiento de suspensiones celulares a partir de segmentos foliares de R. adenotrichus var. “Vino” in vitro, como etapas previas al escalamiento en biorreactor. Para la inducción de callo, se utilizarán diferentes concentraciones de 2,4-D y a partir del mejor tratamiento, se trazará una curva de crecimiento con los indicadores de peso seco y peso fresco. Con muestras de callo en fase exponencial, se establecerán suspensiones celulares de 25 ml, utilizando dos tipos de medio: uno con la misma composición del mejor medio de inducción de callo y otro sin 2,4-D. Para la obtención de suspensiones finas, se realizarán subcultivos repetidos y posteriormente se filtrarán haciendo uso de un tamiz de 80 mesh. A partir de la biomasa retenida, se establecerán suspensiones con concentración conocida de biomasa. Se evaluará volumen celular empacado, peso fresco y peso seco, cada tres días desde el establecimiento inicial, con lo que se trazarán las curvas de crecimiento. A partir del mejor tratamiento, se realizarán pruebas con los compuestos elicitores Quitina y Ácido Jasmónico con el fin de inducir una mayor producción de antioxidantes, lo cual será evaluado mediante HPLC. También se evaluará la concentración de polifenoles por medio del método Folin-Ciocalteu y la actividad antioxidante mediante la técnica del radical DPPH.
Palabras Claves
Rubus adenotrichus, mora, callogénesis, suspensión celular, callo, antioxidante, elicitor.